Como executar a coloração da cápsula de uma bactéria

Objetivo de executar cápsula de coloração de bactérias, para observar a cápsula bacteriana.

Objetivo:

Em algumas bactérias, a parede celular é circundada por um envelope celular viscoso chamado "cápsula". É feito de polissacarídeo, glicoproteína ou polipeptídeo.

Quando a cápsula é muito fina para ser observada sob microscópio de luz, é chamada de 'microcápsula' e quando é tão espessa que muitas células são embutidas na matriz capsular; é chamado de 'lodo'.

Com base na presença ou ausência de cápsula, as bactérias são de dois tipos:

(1) Bactérias Capsuladas:

Uma bactéria, que possui cápsula, é uma bactéria capsulada.

(2) Bactérias não capsuladas:

Uma bactéria que não possui cápsula é uma bactéria não capsulada

O objetivo da coloração da cápsula é observar a cápsula bacteriana, distinguindo o material capsular da célula bacteriana.

Princípio:

Na coloração da cápsula, um esfregaço de bactérias é feito no centro de uma lâmina. Não é fixado pelo calor, já que o encolhimento da célula causado pelo aquecimento pode criar uma zona clara ao redor da célula, que pode ser confundida com uma cápsula.

Além disso, como o material capsular é solúvel em água e pode ser lavado com lavagem vigorosa, apenas dois reagentes são utilizados na coloração sem qualquer lavagem a água entre. Um dos dois reagentes é a mancha primária, cristal violeta. Transmite uma cor azul-púrpura escura a ambas as células, assim como à cápsula.

No entanto, é "absorvido" na célula devido à natureza iónica dos componentes celulares, enquanto que simplesmente "adere" à cápsula, devido à natureza não iónica do material capsular. Para evitar o deslocamento do material capsular, o esfregaço não é lavado com água.

O segundo reagente, o sulfato de cobre atua tanto como um agente descolorante quanto como uma contra-mancha. Ele descolora removendo o excesso de violeta de cristal ao redor das células, bem como o cristal violeta aderido à cápsula. Também contra-mancha a cápsula e transmite uma cor azul clara a ela. A cápsula agora aparece azul-clara, enquanto a célula parece azul-púrpura.

Materiais requisitados:

Slide, loop, óleo de imersão, microscópio, mancha violeta de cristal, solução de sulfato de cobre (20%).

Procedimento:

1. A lâmina é limpa adequadamente sob água da torneira, de modo que a água não permaneça como gotas em sua superfície (Figura 5.14).

2. A água aderente é eliminada com papel absorvente e a lâmina é seca ao ar.

3. Um esfregaço de bactérias é preparado no centro da lâmina em dois métodos como se segue.

(uma) Se as bactérias cultivadas em placa de ágar ou ágar inclinado forem observadas, uma gota de água é colocada no centro da lâmina e uma alça de bactérias da placa ou inclinação é transferida para ela por um circuito esterilizado sobre a chama. Então, por rotação lenta do laço na gota, uma suspensão de bactéria é feita e é esparramada até que um esfregaço seja obtido.

b) Se as bactérias crescidas em caldo líquido devem ser observadas, uma gota da suspensão de bactérias é colocada diretamente no centro da lâmina por um laço esterilizado por chama e um esfregaço é feito por espalhamento.

4. O esfregaço é seco ao ar. Nenhuma fixação de calor é feita, pois o encolhimento da célula resultante pode criar uma zona clara ao redor da bactéria, que pode ser confundida com uma cápsula.

5. O esfregaço é inundado com a mancha primária, cristal violeta, por 5-7 minutos.

6. O esfregaço é lavado com solução de sulfato de cobre a 20%. Para evitar o deslocamento do material capsular, o esfregaço não é lavado com água.

7. A lâmina é seca com papel absorvente.

8. O slide é preso ao estágio do microscópio e o esfregaço é observado sob baixa potência e alta objetiva seca.

9. Uma gota de óleo de imersão é colocada no esfregaço.

10. O esfregaço é observado sob o objetivo de imersão em óleo.