Princípio de funcionamento do microscópio de fluorescência (com figura)

Leia este artigo para aprender sobre o funcionamento do microscópio de fluorescência!

Princípio de trabalho:

Muitas substâncias absorvem a luz. No entanto, alguns deles, depois de absorver a luz de um determinado comprimento de onda e energia, emitem luz de um comprimento de onda maior e menor energia.

Tais substâncias são chamadas "substâncias fluorescentes".

A aplicação deste fenômeno é a base do microscópio de fluorescência. Na prática, os micróbios são corados com um corante fluorescente e depois iluminados com luz azul. O corante absorve a luz azul (menor comprimento de onda) e emite luz verde (maior comprimento de onda).

Em um microscópio de fluorescência, uma lâmpada de arco de mercúrio de alta intensidade é usada como fonte de luz (Figura 4.11). Emite luz branca, que é passada através de um "filtro excitador". Permite apenas o componente azul da luz branca (a luz branca é composta por sete cores, que na ordem decrescente de comprimento de onda são violeta, índigo, azul, verde, amarelo, laranja e vermelho) para atravessá-lo e bloquear todas as outras. componentes de cor.

Um espelho dicroico, que reflete a luz azul, mas permite que a luz verde seja usada no caminho da luz azul. O espelho é fixado em tal ângulo que a luz azul é refletida para baixo para o espécime.

A amostra é previamente corada com um corante fluorescente, como laranja de acridina NO, acridina amarela, acriflavina, tioflavina S, tioflavina T ou titânio amarelo G. Algumas partes da amostra retêm o corante, enquanto outras não. As porções, que retêm o corante fluorescente, absorvem a luz azul e emitem luz verde. A luz verde emitida vai para cima e passa pelo espelho dicróico. Ele reflete a luz azul de volta, se houver, e permite que apenas a luz verde passe.

Então, a luz atinge um "filtro de barreira". Ele permite que a luz verde passe para os olhos e bloqueia qualquer luz azul residual da amostra, que pode não ter sido completamente refletida pelo espelho dicróico.

Assim, o olho percebe as porções coradas do espécime como objeto verde brilhante contra um fundo negro, enquanto as partes não manchadas do espécime permanecem invisíveis.