Hibridização In Situ Fluorescente (FISH)
Neste artigo vamos discutir sobre a hibridização fluorescente in situ (FISH).
É uma técnica de laboratório usada para determinar quantas cópias do segmento específico de DNA estão presentes em uma célula. Identifica a região cromossômica específica em preparações citológicas. No laboratório, um segmento de DNA é quimicamente modificado ou corado por corante fluorescente e quando examinado sob microscópio fluorescente parece fluorescente de cor muito brilhante.
A hibridização in situ com fluorescência aumentou muito a sensibilidade, especificidade e resolução da análise cromossômica.
As vantagens desta técnica são numerosas mas algumas são mencionadas como segue:
(1) A resolução deste método é muito melhor do que a da bandagem cromossômica tradicional e aproximadamente 2 mega-bases (Mb) de comprimento.
(2) O protocolo desta técnica é fácil e é aplicável tanto para células em divisão como para células não divididas. Esta técnica pode identificar uma série de mutações, incluindo deleção, duplicação, aneuploidia e presença de cromossomos derivados. Esta técnica também é comumente usada para monitorar doenças recorrentes ou residuais em pacientes com transplante de medula óssea.
FISH (Hibridização In Situ Fluorescente) é geralmente realizado em sangue periférico estimulado para análise cromossômica e identificação de translocação e deleção específicas. Por exemplo, é usado para demonstrar o cromossomo Filadélfia (Ph 1 ) formado pela translocação entre os cromossomos 9 e 22 e causa uma leucemia mielóide crônica (LMC).
Ele também é usado na identificação da translocação entre os cromossomos 8 e 14, que causa o linfoma de Burkitt e entre os cromossomos 18 e 14, que resulta na leucemia de células B. Também é usado para o diagnóstico da síndrome de Down.
No procedimento FISH, as culturas celulares podem ser preparadas. Os cromossomos metafásicos / prometáfase são fixados em uma lâmina de vidro. Além disso, o FISH pode ser modificado para análise de núcleos em interfase. Então, os cromossomos são desnaturados; uma sonda de DNA rotulada é então introduzida e, em seguida, a sonda é hibridizada ao cromossomo na lâmina. Portanto, o termo hibridização 'in situ' é dado.
As sondas de DNA são marcadas com fluorocromo, essa sonda dá sinal fluorescente e pode ser vista com microscopia de fluorescência. A fluorescência pode ser deduzida com a ajuda de filtros fixados no microscópio fluorescente.
As sondas FISH têm aproximadamente 40 kilo bases (kb) de comprimento e são detectadas como um sinal fluorescente duplo em cada membro de um par de cromossomos. O ponto duplo corresponde aos sinais de cada uma das duas cromátides irmãs alinhadas.
Em sua aplicação simples, um padrão FISH normal para qualquer sonda seria dois conjuntos de pontos duplos, um conjunto para cada membro dos cromossomos normalmente emparelhados. Esses pontos duplos geralmente se fundem para formar um sinal. Células monossômicas para a região cromossômica em questão mostrariam apenas um único conjunto de pontos duplos por núcleo, enquanto células trissômicas mostrariam três conjuntos de pontos duplos.
