Notas úteis sobre Enzima Papaína e Enzima Pepsina
Imunoglobulinas são proteínas e geralmente são resistentes à digestão por enzimas.
No entanto, a enzima papaína e pepsina clivam as moléculas de imunoglobulina. Os fragmentos gerados pela papaína e pepsina são úteis para estudos de estrutura e funções da imunoglobulina. Mas os locais de clivagem dessas duas enzimas são diferentes (Figura 9.5).
Fig. 9.5: Diagrama esquemático da fragmentação proteolítica da imunoglobulina por tratamento breve com as enzimas papaína e pepsina.
A enzima papaína cliva a imunoglobulina no lado N-terminal da ligação dissulfureto de cadeia inter-pesada e produz três fragmentos (dois fragmentos Fab e um fragmento Fc). A enzima pepsina cliva a imunoglobulina na região C-terminal e produz um grande fragmento (que contém duas regiões Fab) chamado F (ab ') 2 . As restantes cadeias pesadas no lado C-terminal são digeridas em múltiplos péptidos pequenos
1. Enzima Papain:
A papaína enzimática cliva a região charneira no lado N-terminal dos dissulfuretos da cadeia inter-pesada e isto resulta na formação de três fragmentos. (Dois fragmentos contendo a região variável e um fragmento contendo as regiões CH2 e CH3 ). Os dois fragmentos contendo a região variável são chamados; Fragmentos Fab, (isto é, ligação ao antígeno do fragmento), pois possuem os sítios de ligação ao antígeno.
O terceiro fragmento compreende as porções do terminal carboxilo de ambas as cadeias pesadas mantidas juntas por dissulfuretos. Geralmente, a estrutura do terceiro fragmento é idêntica para muitas moléculas de imunoglobulina diferentes.
Assim, fragmentos desses tipos podem ser cristalizados, mesmo que consistam em muitas imunoglobulinas diferentes. Então, esse fragmento é chamado fragmento cristalizável ou fragmento Fc. A maioria das propriedades biológicas secundárias das imunoglobulinas depende das sequências na região Fc. Esta também é a região reconhecida pelos receptores Fc em muitos tipos de células.
2. Enzima Pepsina:
A enzima pepsina cliva a imunoglobulina no lado carboxi-terminal da região charneira resultando em um grande fragmento chamado F (ab ') 2 . O F (ab ') 2 tem dois fragmentos Fab ligados por ligações dissulfureto. A regi Fc extensamente degradada por pepsina e normalmente n permanece fragmento Fc intacto ap digest por pepsina.
