Técnicas de Ensaio Imuno-histoquímico para Detecção de Antígenos Tumorais
Os ensaios imuno-histoquímicos são amplamente utilizados para detectar antígenos tumorais e classificar os tipos de linfócitos em seções de patologia cirúrgica.
A amostra de tecido é fixada em uma lâmina de vidro.
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O mAb marcado com enzima (conjugado) é colocado sobre a amostra e incubado.
Eu. Se a amostra tem antígeno específico contra o mAb, o conjugado se liga ao antígeno na amostra.
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Após a lavagem, o substrato é adicionado e incubado.
Eu. O desenvolvimento da cor denota que o antigénio específico contra o mAb está presente na secção do tecido.
ii. Na ausência de antígeno específico, não há desenvolvimento de cor.
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A lâmina é lavada e a seção de tecido é vista sob o microscópio para a presença de cor.
A peroxidase de rábano (HRP) é a enzima comumente usada nas técnicas imunohistoquímicas. O substrato para HRP é peróxido de hidrogênio e diaminobenzidina. A reação de HRP com diaminobenzidina produz uma cor preta.
A peroxidase - antiperoxidase (PAP) é outro método usado em patologia cirúrgica para detectar enzimas e antígenos relacionados a tumores.
É um método de três etapas:
Passo 1:
O tecido suspeito de ter um antígeno particular é fixado a uma lâmina de vidro.
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O anticorpo de coelho conhecido para o antígeno em questão é depositado no tecido (suspeito de ter o antígeno) fixado a uma lâmina de vidro.
Eu. Se o antígeno correspondente estiver no tecido, o anticorpo se liga a ele. A lâmina é lavada após a incubação.
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Passo 2:
A imunoglobulina anti-coelho (chamada anticorpo link) é descartada no slide.
Eu. Se o primeiro anticorpo de coelho estiver na lâmina (ligado ao antígeno), a imunoglobulina anti-coelho se liga ao anticorpo de coelho. Após a incubação, a lâmina é lavada.
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Etapas 3:
Um complexo imune, consistindo em anticorpos de coelho para a peroxidase, combinado com a peroxidase, é descartado. Este anticorpo de coelho irá ligar-se à imunoglobulina anti-coelho (ligação anticorpo-passo 2) através da sua região Fc. Após a incubação, a lâmina é lavada.
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Finalmente, é adicionado substrato de peroxidase. O substrato reagirá com a peroxidase resultando na formação de um produto colorido que é visto ao microscópio.
Eu. A presença do produto colorido no tecido indica a presença do antígeno correspondente.
ii. A ausência do produto colorido no slide indica que o antígeno em questão está ausente no tecido.
